【实验试剂及材料】

1. MACS buffer：500 mL DPBS + 2.5 g BSA （Sigma, Cat: B2064）+ 2 mL 0.5M EDTA（Thermo, Cat: AM9260G）
2. 荧光标记的细胞表面分子相关抗体
3. 5 mL 流式管（BD Falcon）
4. U底96孔板1 mL注射器
5. 10 mL注射器70 um筛网6孔细胞培养板
6. 50 mL离心管，15 mL离心管
7. 30% Percoll（GE, Cat: 17089109）：1份 10X HBSS + 9份 Percoll原液→100% Percoll→+1X HBSS 稀释至30%（30%包含髓系细胞，只研究淋巴细胞可用40%）
8. 消化液配制【6ml/个肿瘤（单个最大1.5cm³）】：1:50（120ul） RPMI1640+10%胎牛血清+1mg/mL胶原蛋白酶IV+0.1mg/mL DNase，1640稀释至6mL
9. 胶原蛋白酶IV（Worthington，Cat: LS004189）储备液：HBSS稀释至50mg/ml
10. DNase（Sigma，Cat: DN25）储备液：1640稀释至50mg/ml
11. 国产胎牛血清（消化肿瘤用，普诺赛，Cat: 164210）
12. 红细胞裂解液（碧云天，Cat: C3702）

【实验内容】

1. 取荷瘤小鼠肿瘤组织，浸泡在含1%胎牛血清+1%青链霉素的PBS中，在10cm培养皿中用无菌的眼科剪将肿瘤组织剪碎至约2-3mm³。
2. 500g×5min离心。
3. 弃上清，用肿瘤组织消化液重悬剪碎的肿瘤组织，37℃恒温摇床160rpm  2小时。肿瘤组织消化液为：RPMI1640+10%胎牛血清+1mg/mL胶原蛋白酶IV+0.1mg/mL DNase。（消化液6ml/个肿瘤）。
4. 将组织倒入10cm培养皿中，加入PBS终止，用10mL注射器反复吹打消化后的肿瘤组织后，用70μm滤网过滤。
5. 收集滤液后500g×5min离心，用红细胞裂解液3-4ml/管重悬细胞沉淀，冰上裂解5min。
6. 加入2倍体积的PBS终止反应，500g×5min离心。
7. 过30% Percoll：每管加入12 ml 30% Percoll重悬沉淀，室温1000g×30min，升一降一，45min。
8. 小心吸走上清，加入PBS洗一次，500g×5min离心后，加入PBS重悬沉淀，将细胞悬液移到流式管中待流式染色。